NAMJENA

CEOS DNAse Test agar koristi se za diferencijaciju mikroorganizama na temelju dezoksiribonukleaze (DNAza).

NAČELA I OBJAŠNJENJA

Godine 1956. Weckman i Catlin dokazali su korelaciju između povećane aktivnosti DNAze u Staphylococcus aureus i pozitivne aktivnosti koagulaze. Zaključili su da se aktivnost DNAze može koristiti za identifikaciju potencijalnih patogenih stafilokoka. DiSalvo je potvrdio njihove rezultate dokazivanjem odlične korelacije između koagulaze i aktivnosti DNAze u stafilokokima koji su izolirani iz kliničkih uzoraka. Jeffries, Holtman i Guse stavili su DNK u agar podlogu kako bi proučavali proizvodnju DNAze koju proizvode bakterije i gljivice. U CEOS DNAse Test agar tripton osigurava hranjive tvari za rast. Natrij klorid održava osmotsku ravnotežu. Deoksiribonukleinska kiselina s velikim brojem molekula omogućuje otkrivanje deoksiribonukleaze (DNAze) koja depolimerizira DNK. Po završet- ku inkubacije podloge sojem za ispitivanje, ploča se natapa klorovodičnom kiselinom koja taloži polimerizirani DNK i na taj način čini podlogu neprozirnom. Organizmi koji razgrađuju DNK proizvode čiste zone oko područja rasta. Ova se podloga uglavnom koristi u identifikaciji stafilikoka, ali se također može koristiti za otkrivanje aktivnosti DNAze u ostalim mikroorganizmima.

REAGENSI

CEOS DNAse Test agar (g/l)

Tripton	20,00
Natrijev klorid	5,00
Deoksiribonukleinska kiselina	2,00
Agar	15,00

pH 7,3 ± 0,2
Boja: prozirna, svijetlo do srednje žuta.

KORISNIČKA KONTROLA KVALITETE

Inokulirati reprezentativne uzorke dolje navedenim sojevima.

Mikroorganizam	Rezultati ispitivanja
Staphylococcus aureus ATCC 25923	Pozitivna DNAza
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228	Negativna DNAza
Serratia marcescens ATCC 13880	Pozitivna DNAza
Klebsiella pneumoniae ATCC 33495	Negativna DNAza
Nije inokulirano	Svijetložuta do srednje žuta, može biti lagano svjetlucava

Inokulirati podlogu na način da se mikrobiološkom petljom zahvati rast s ploče krvnog agara poput CEOS Columbia agar sa 5% krvi. Na jednoj ploči moguće je inokulirati do četiri organizma. Preporučuje se uključiti i negativnu kontrolu, primjerice Staphylococcus epidermidis, te pozitivnu kontrolu, primjerice S. aureus. Aerobno inkubirati ploče 18 do 24 sata pri temperaturi od 35 – 37°C. U slučaju da se ispituju sojevi ostalih bakterijskih vrsta ili gljivica, inkubirati ih u skladu sa zahtjevima. Po završetku inkubacije natopiti ploče s dovoljnom količinom 1 N klorovodične kiseline (HCI). Ostaviti stajati dvije minute kako bi kiselina prodrla u cijelu podlogu. Pozitivne kolonije DNAze bit će okružene čistim zonama u podlozi.