NAMJENA

CEOS Krvni agar je medij za izolaciju i uzgoj brzo rastućih mikroorganizama, posebice patogenih vrsta, i detekciju hemolitičkih reakcija.

NAČELA I OBJAŠNJENJA

CEOS Krvni agar je višenamjenski medij prikladan za rast patogenih i ne-patogenih mikroorganizama. S defibriniranom životinjskom krvi medij je prikladan za pripremu krvnih agar ploča za uzgoj streptokoka, stafilokoka, pneumokoka i za određivanje njihove hemolitičke aktivnosti. Na krvnom agaru s dodatkom konjske krvi H.influenzae razvija β-hemolitičku aureolu i lažne S.pyogenes. Sa serumom ili drugim obogaćenjima CEOS Krvni agar je prikladan za uzgoj brzorastućih mikroorganizama. Bez bilo kakvih dodataka medij se koristi kao bogat hranjivi medij. Peptoni prisutan u mediju dozvoljava točne hemolitičke zone i povećava veličinu kolonija. Ekstrakt govedine i kvasca osiguravaju dušik, ugljik, aminokiseline i vitamine. Medij sadrži natrij klorid koji osigurava osmotsku ravnotežu. Obogaćivanje s krvi (5-10%) osigurava dodatne faktore rasta za brzorastuće mikroorganizme i osnova je za određivanje hemolitičkih reakcija. Hemolitičke strukture mogu varirati ovisno o izvoru životinjske krvi ili tipu osnovnog medija.

REAGENSI

CEOS Krvni agar (g/l)

Peptoni	10.00
Triptoza	10.00
Natrij klorid	5.00
Defibrinirana životinjska krv	50 ml
Agar	15.00

pH 7.3 ± 0.2
Boja: neprozirna, crvena.

KORISNIČKA KONTROLA KVALITETE

Inokulirati reprezentativne uzorke sa sljedećim sojevima:

Mikroorganizmi	rast	Oporavak
E.coli ATCC 25922	dobar rast	>=70%
S.pyogenes ATCC 19615	dobar rast, β hemoliza	>=70%
S.aureus ATCC 25923	dobar rast, β hemoliza	>=70%
S.pneumoniae ATCC 6305	dobar rast, β hemoliza	>=70%

Inokulum za produktivnost: 50-100 CFU Inkubirati pri temperaturi od 35°C kroz 24-48 sata u atmosferi obogaćenoj CO2.

Koristiti standardne procedure za dobivanje izoliranih kultura iz uzoraka. Nakon nacijepljivanja, ubosti povr- šinu agara nekoliko puta kako bi se omogućilo taloženje β-hemolitičkih streptokoka ispod površine agara. Rast pod površinom će pokazati najpouzdanije hemolitičke reakcije uslijed aktivnosti kisik-stabilnih i kisik-nestabilnih streptolizina. Kako mnogi patogeni zahtijevaju CO2 u primarnoj izolaciji, ploče se mogu inkubirati u atmosferi koja sadrži oko 3-10% CO2. Inkubirati ploče na 35°C±2/18-24h.
Rezultati
Kolonijska morfologija na krvnom agaru koji sadrži 5% ovčje krvi je:
Hemolitički streptokoki mogu se pojaviti kao propu- sni za svjetlo (ali neproziran) ili neprozirni, sivkasti, mali (1mm) ili velike čupave ili sluzave (2-4mm) kolonije, okružene zonom hemolize. Potrebno je napraviti boja- nje po Gramu i ispitati kako bi se provjerio makroskop- ski nalaz (drugi mikroorganizmi koji mogu uzrokovati hemolizu uključujući Listeriu, razne korinobakterije, hemolitičke stafilokoke, E.coli i Pseudomonas). Pneumokoki se obično pojavljuju kao vrlo ravne, glatke, prozirne za svjetlo, sivkaste i ponekad sluzave kolonije okružene uskom zonom „zelene“ (α) hemolize. Stafilokoki se pojavljuju kao neprozirne, bijele do zlatno-žute kolonije sa ili bez zona β hemolize. Listeria se bojenjem po Gramu može razlikovati po njihovom štapićastom obliku i po pokretljivosti na sobnoj temperaturi. Stvaraju se male zone β hemolize.